Реакция ферментной амплификации по Никингу
Реакция никинг-ферментной амплификации (NEAR) - это метод амплификации ДНК in vitro, подобный полимеразной цепной реакции (ПЦР). NEAR является изотермической, репликация ДНК при постоянной температуре с использованием полимеразы (и фермента никинга) для экспоненциальной амплификации ДНК в диапазоне температур от 55 °C до 59 °C.
Одним из недостатков ПЦР является то, что она требует времени на распутывание двухцепочечной ДНК с помощью тепла на одноцепочечную (процесс называется денатурацией). Это приводит к тому, что время амплификации обычно составляет тридцать минут или более для получения значительного количества амплифицированных продуктов.
Потенциальными преимуществами NEAR по сравнению с ПЦР являются повышенная скорость и более низкие энергетические требования - характеристики, общие с другими схемами изотермической амплификации.[1] Основной недостаток NEAR по сравнению с ПЦР заключается в том, что производство неспецифических продуктов амплификации является общей проблемой для реакций изотермической амплификации.[2]
В реакции NEAR используются эндонуклеазы природного происхождения или сконструированные эндонуклеазы, которые вносят разрыв нити только на одной нити в месте расщепления двухцепочечной ДНК. Способность некоторых из этих ферментов катализировать изотермическую амплификацию ДНК была раскрыта, но не заявлена в патентах, выданных на сами ферменты.[3][4]
См. также[править]
Примечания[править]
- ↑ Biosensors 2013, 3, 18-43; doi:10.3390/bios3010018
- ↑ Biochemistry. 2008 Sep 23;47(38):9987-99. doi: 10.1021/bi800746p.
- ↑ US Patent 6,191,267. February 20, 2001.
- ↑ US Patent 6,660,475. December 9, 2003
- ↑ United States Patent 7,972,820. July 5, 2011. Isothermal amplification of nucleic acids on a solid support